美國斯克利普斯研究所Xin Jin研究組利用大規(guī)模并行體內(nèi)Perturb-seq技術，揭示了大腦皮層發(fā)育過程中細胞類型特異性轉(zhuǎn)錄網(wǎng)絡。相關研究近日在線發(fā)表于《細胞》。
研究人員利用AAV的多功能向性和標記能力，擴大了體內(nèi)CRISPR篩選的規(guī)模，在胚胎到成人大腦和外周神經(jīng)系統(tǒng)中進行了單細胞轉(zhuǎn)錄組表型分析。通過對AAV血清型中的86種載體結(jié)合轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)進行廣泛測試，研究人員大大提高了標記效果，并將體內(nèi)基因遞送從數(shù)周加速到數(shù)天。子宮內(nèi)的原理性驗證篩選確定了Foxg1的多效應，強調(diào)了它對第六層皮層丘腦神經(jīng)元細胞命運特化所必需的獨特網(wǎng)絡的嚴格調(diào)控。
值得注意的是，該平臺可以標記大于6%的腦細胞，超過了目前慢病毒標記小于0.1%的最先進效率，從而在一次實驗中分析超過3萬個細胞，并實現(xiàn)大規(guī)模并行體內(nèi)Perturb-seq。它與各種表型測量（單細胞或空間多組學）兼容，提供了一種靈活的方法，可用于體內(nèi)跨細胞類型的基因功能檢測，將基因變異轉(zhuǎn)化為因果功能。
來源：科學網(wǎng)-中國科學報
作者：小柯