衰老是一個(gè)涉及氧化應(yīng)激、炎癥、自噬、線粒體損傷、端粒酶損傷和衰老的多因素過(guò)程。隨著年齡的增長(zhǎng)，衰老細(xì)胞的穩(wěn)定積累會(huì)產(chǎn)生不利后果，即這些非增殖細(xì)胞占據(jù)關(guān)鍵的細(xì)胞生態(tài)位，并分泌促炎細(xì)胞因子，導(dǎo)致與衰老相關(guān)的疾病、虛弱和發(fā)病率。因此，衰老理論認(rèn)為，人類衰老是衰老細(xì)胞積累的結(jié)果。與此相一致的是，從轉(zhuǎn)基因孕小鼠和自然衰老小鼠中消除衰老細(xì)胞，可以增強(qiáng)對(duì)衰老相關(guān)疾病的抵抗力，延長(zhǎng)壽命。
免疫系統(tǒng)在衰老過(guò)程中起著關(guān)鍵作用，研究表明，白細(xì)胞介素6（IL-6）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）水平升高與心臟病和癡呆等衰老疾病直接相關(guān)。因此，免疫衰老在衰老過(guò)程中起關(guān)鍵作用。
衰老的免疫系統(tǒng)細(xì)胞可能是所有衰老細(xì)胞中最有害的細(xì)胞之一，因?yàn)樗鼈儠?huì)在其他身體器官和系統(tǒng)中傳播組織損傷和衰老。免疫系統(tǒng)具有控制衰老的機(jī)制。積聚的衰老細(xì)胞通常被免疫系統(tǒng)清除。因此，衰老的免疫系統(tǒng)是維持和延長(zhǎng)健康的關(guān)鍵治療目標(biāo)。然而，免疫系統(tǒng)對(duì)抗自身衰老的能力是有限的。
作為介導(dǎo)抗腫瘤和抗病毒反應(yīng)的主要先天性淋巴細(xì)胞亞群，NK細(xì)胞也參與了衰老細(xì)胞的監(jiān)測(cè)。在體外和小鼠模型中NK細(xì)胞消除衰老細(xì)胞，其中NK細(xì)胞參與小鼠模型中的纖維化逆轉(zhuǎn)和衰老細(xì)胞清除。
目前，缺乏關(guān)于NK細(xì)胞對(duì)人類免疫衰老的影響的數(shù)據(jù)。在這里，我們通過(guò)5個(gè)案例研究了自體增殖和活化NK細(xì)胞(aNK)在免疫衰老中的作用。我們的數(shù)據(jù)表明，NK細(xì)胞治療是安全的，可以減少人類的免疫衰退。此外證明了免疫衰老在減少與年齡相關(guān)的炎癥反應(yīng)中的作用。
隊(duì)列1由3名個(gè)體組成，為70歲（A）、50歲（B）和41歲（C）的男性。NK細(xì)胞擴(kuò)增后，來(lái)自隊(duì)列1的每個(gè)個(gè)體接受1×109個(gè)NK細(xì)胞。隊(duì)列2由2名個(gè)體組成，1名50歲女性（D）和1名52歲男性（E）。隊(duì)列2接受2次，每次2×109NK細(xì)胞輸注。
PBMC的CD3（-）CD56（+）NK細(xì)胞中位數(shù)為11.2%（5.9–13.6）。平均培養(yǎng)15天后（14–19），在擴(kuò)增指數(shù)階段的峰值收獲aNK細(xì)胞，中值為91.0%的CD3（-）CD56（+）aNK細(xì)胞（范圍83.4–96.0），平均擴(kuò)增198倍（范圍128–373）。
為了證明這種擴(kuò)增和刺激NK細(xì)胞的方法是有效的，我們用LDH釋放試驗(yàn)在體外測(cè)試了PBMC和aNK細(xì)胞對(duì)K562細(xì)胞的細(xì)胞毒性。aNK細(xì)胞在體外以劑量依賴的方式獲得更高水平的抗K526細(xì)胞的細(xì)胞毒性活性。
使用衰老的皮膚成纖維細(xì)胞，通過(guò)中性紅吸收和釋放試驗(yàn)評(píng)估NK細(xì)胞的細(xì)胞毒性效應(yīng)。在K562細(xì)胞中觀察到，aNK細(xì)胞對(duì)衰老皮膚成纖維細(xì)胞的細(xì)胞毒性水平高于幼稚NK細(xì)胞。
此外，我們通過(guò)視頻記錄了aNK細(xì)胞活性的體外細(xì)胞毒性。在這里，我們展示了aNK細(xì)胞消除衰老成纖維細(xì)胞的時(shí)間過(guò)程視頻。值得注意的是，視頻顯示了aNK之間的高度合作，aNK細(xì)胞同時(shí)啟動(dòng)細(xì)胞毒性，并消除了不同目標(biāo)上的衰老成纖維細(xì)胞。
三個(gè)個(gè)體（隊(duì)列1）輸注1.0×109自體aNK細(xì)胞。未發(fā)現(xiàn)不良反應(yīng)，所有血液檢測(cè)指標(biāo)結(jié)果均在正常生理范圍內(nèi)。在不同的時(shí)間點(diǎn)，從供體A、B和C分離PBMC，并在輸注aNK細(xì)胞之前以及輸注后第14天和第90天評(píng)估衰老標(biāo)記物p16和β-半乳糖苷酶。aNK細(xì)胞輸注后，三個(gè)人的p16和β-半乳糖苷酶水平均降低。在aNK細(xì)胞輸注前（第0天），觀察到所有三個(gè)供體的兩種標(biāo)記物的最高水平。aNK細(xì)胞輸注后90天，衰老標(biāo)記物向基線增加，盡管在所有三個(gè)供體中仍低于基線。值得注意的是，個(gè)體年齡越大，輸注aNK細(xì)胞前p16和β-半乳糖苷酶的水平越高。同樣，在aNK細(xì)胞輸注后第14天，p16和β-半乳糖苷酶的年齡較大的個(gè)體出現(xiàn)了更大的減少。數(shù)據(jù)表明，aNK細(xì)胞會(huì)減少PBMC中衰老標(biāo)記物的表達(dá)。
為了了解aNK細(xì)胞的其他影響，我們對(duì)供體a、B和C進(jìn)行了50種細(xì)胞因子炎癥譜分析。所有3個(gè)供體的結(jié)果都不同。在進(jìn)行的50種細(xì)胞因子中，有27種可在所有3個(gè)供體中檢測(cè)到。由于許多人沒(méi)有表現(xiàn)出相關(guān)的變化或模式，在此，我們提出了7種不同的細(xì)胞因子/蛋白質(zhì)，這些細(xì)胞因子/蛋白在aNK細(xì)胞輸注后在所有三個(gè)供體中都有趨勢(shì)（補(bǔ)充材料2）。輸注aNK細(xì)胞后，T細(xì)胞特異性RANTES呈升高趨勢(shì)，而鐵蛋白、單核細(xì)胞趨化蛋白-1、IL-6和IFN-γ呈下降趨勢(shì)。值得注意的是，患有炎癥性腸?。↖BD）的供體C在輸注aNK細(xì)胞之前炎癥標(biāo)志物IL-6、IL-17A、IFN-γ和IL-27上調(diào)，在許多情況下輸注后顯著降低至幾乎檢測(cè)不到。
為了再現(xiàn)單劑量輸注aNK細(xì)胞對(duì)衰老標(biāo)志物的影響（隊(duì)列1），兩個(gè)個(gè)體（隊(duì)列2，供體D和E）每次輸注2.0×109個(gè)aNK細(xì)胞，192天再次輸注。輸注前（基線）在輸注當(dāng)天（0和192）采集血液?？傃芯科跒?59天。對(duì)于隊(duì)列2，第一次aNK細(xì)胞輸注對(duì)衰老標(biāo)志物的影響與隊(duì)列1相似。與第一次輸注相比，第二次輸注再次下降。
安全性和血液數(shù)據(jù)未顯示，所有輸注均耐受良好，無(wú)不良反應(yīng)。
總之，數(shù)據(jù)表明，一次或兩次輸注aNK是安全的，會(huì)在長(zhǎng)達(dá)6個(gè)月的時(shí)間內(nèi)抑制免疫衰退。這代表了一種新的治療方法，以減少衰老的有害特征，如炎癥和免疫衰老。由于僅觀察5例，需要對(duì)更大的隊(duì)列和對(duì)照安慰劑進(jìn)行進(jìn)一步研究。
來(lái)源：中華細(xì)胞與干細(xì)胞雜志電子版
原標(biāo)題：回輸自體NK細(xì)胞具有抗衰老功能
作者：編譯/廖聯(lián)明
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